I første scene af franske Jacques Audiards stilfærdigt finurlige western »The Sisters Brothers« er det sort nat over prærien, og man aner to mænd, der nærmer sig et ensomt beliggende træhus. Så brager skudsalverne løs, men det er kun mundingsglimtene, man ser, som skulle det understreges, at vi er i et landskab og i en tid, som der hviler et mytologisk mørke over: Det Vilde Vesten i 1850erne.
Da solen atter stiger, genkender man dog en del af genrens faste ingredienser: De dødeligt effektive håndlangere, Sisters-brødrene Eli (John C. Reilly) og lillebror Charlie (Joaquin Phoenix), bliver hyret af den magtfulde gangstermagnat Kommandøren (Rutger Hauer i en ultrakort scene) til at forfølge og hjembringe en mand med det mystiske navn Hermann Kermit Warm (Riz Ahmed). Hermann Kermit Warm bliver også forfulgt af brødrenes medhjælper, gentleman-detektiven John Morris (Jake Gyllenhaal), der slår følge med ham på hans rejse mod Californien.